WWW.METODICHKA.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Методические указания, пособия
 


Pages:   || 2 |

«Методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки Методические указания МУК. ББК Методы ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и

благополучия человека

Методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы, моллюсков,

ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их

переработки

Методические указания

МУК …….

ББК

Методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы, моллюсков,

ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки:

Методические указания. – М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии

Роспотребнадзора, 2015. ISBN

1. Разработаны ФБУН «Тюменский НИИ краевой инфекционной патологи»

Роспотребнадзора (Т.Ф. Степанова, Р.Г. Фаттахов, М.И. Беляева, А.В. Ушаков, К.Б.

Степанова, И.В. Бакштановская) ББК ©Роспотребнадзор, 2015 ©Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015 Содержание

1. Область применения…………………………………………………………………… 4

2.Нормативные ссылки…………………………………………………………………… 4

3.Общие положения……………………………………………………………................ 5

4. Отбор, хранение и подготовка к исследованию проб гидробионтов и продуктов их переработки…………………………………………………………………………… 7

5. Оборудование реактивы………………………………………………………………. 8

6. Оценка паразитологического состояния водоема…………………………………… 9

7. Методы паразитологического исследования гидробионтов и продуктов их переработки………………………………………………………………………………. 10

7.1. Выбор метода исследования……………………………………………………... 10

7.2. Методика неполного гельминтологического исследования рыбы, земноводных и пресмыкающихся……………………………………………………. 11

7.3. Метод параллельных разрезов …………………………………………………. 13

7.4. Компрессорный метод……………………………………………………………. 14

7.5. Метод переваривания в искусственном желудочном соке……………………. 14

8. Методы установления жизнеспособности личинок гельминтов…………………… 15

8.1. По морфологическим признакам и двигательной активности………………… 15

8.2. Метод электрического стимулирования (с использованием постоянного электрического тока)……………………………………………… 16

8.3. Метод химического воздействия (с использованием химических раздражителей)………………………………………………………………………… 16

8.4. Метод флюоресценции (с использованием ультрафиолетового света)……………………………………………………………………………………. 16

8.5. Метод окрашивания (с использованием красителей)………………………….. 16

9. Методы фиксации и хранения личинок паразитов………………………………….. 17

10. Регистрация результатов исследований рыбной продукции 17 Приложение 1. Дифференциальные признаки плероцеркоидов сем.

Diphyllobothriidae, опасных для здоровья человека …………………………………… 19 Приложение 2. Дифференциальные признаки метацеркарий трематод сем.

Opisthorchidae, Heterophyidae, Nanophyetidae u Echinostomatidae,опасные для здоровья человека……………………………………………………………………….. 23 Приложение 3. Дифференциальные признаки метацеркарий трематод сем.

Paragonimidae, опасных для здоровья человека………………………………………... 27 Приложение 4. Дифференциальные признаки личинок нематод сем.

Dioctophymidae, Gnathostomatidae, Anisakidae, опасных для здоровья человека …… 29 Приложение 5. Определитель метацеркарий трематод………………………………... 33 Приложение 6. Морфологическое строение личинок цестод…………………………. 35 Приложение 7. Морфологическое строение личинок трематод………………………. 36 Приложение 8. Морфологическое строение личинок нематод……………………….. 39 Приложение 9. Фотоизображения личинок сем. Opisthorchidae, Heterophyidae, Nanophyetidae …………………………………………………………………………… 41 Список литературы……………………………………………………………………….. 44

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы санитарнопаразитологической экспертизы рыбы и нерыбных объектов промысла (моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся), а также продуктов их переработки на соответствие установленным требованиям санитарно-эпидемиологической безопасности.

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. Настоящие методические указания могут быть использованы другими испытательными лабораториями в установленном порядке.

2. Нормативные ссылки

2.1. Федеральный закон от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации».

2.2. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2.3. Федеральный закон от 02.01.2000 № 29-ФЗ «О качестве и безопасности пищевых продуктов».

2.4. Технический регламент Таможенного союза ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции», утвержден Комиссией Таможенного союза 09.12.2011 №880.

2.5. ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».

2.6. ГОСТ Р 54378-2011 «Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Методы определения жизнеспособности личинок гельминтов»

2.7. ГОСТ Р. RU. 0001.8.1.0057 «Правила сертификации рыбы, рыбопродуктов и продуктов моря на соответствие требованиям безопасности»

2.8. ГОСТ 7631-85. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний. Изменение N 2 к ГОСТу 7631-85. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки.

Утверждено Постановлением Гостандарта СССР от 25.10.89 № 3195.

2.9. ГОСТ 31339-2006 Межгосударственный стандарт «Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб»

2.10. ГОСТ 7631-2008 Межгосударственный стандарт «Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Методы определения органолептических и физических показателей»

2.11. ГОСТ 7636-85. «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа».

2.12. СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».

2.13. СанПиН 3.2.3215-14 «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации».

2.14. СанПиН 2.3.4.050-96 «Производство и реализация рыбной продукции»

2.15. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней" и дополнение СП 1.3.2518-09; СП 1.3.2885-11 "Дополнения и изменения 2 к СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

2.16. СП 1.1.2193-07 «Организация и проведение производственного контроля за соблюдением санитарных правил и выполнением санитарно-эпидемиологических (профилактических) мероприятий». Изменения и дополнения 1 к СП 1.1.1058-03.

2.17. МУ 3.2.1756-03 «Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями».

2.18. Методика паразитологического инспектирования морской рыбы и рыбной продукции (Морская рыба - сырец, рыба охлажденная и мороженая). Утв. Минрыбхозом СССР 29.12.88. - М., 1989.

3. Общие положения

3.1. К заболеваниям, передающимся через необезвреженную рыбу, ракообразных, моллюсков, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки, относятся описторхоз, дифиллоботриозы, клонорхоз, метагонимоз, нанофиетоз, псевдамфистомоз, анизакидозы, которые являются наиболее распространенными. Существует риск заражения личинками Metorchis bilis, Heterophyes heterophyes, Echinochasmus perfoliatus, Diplogonoporus grandis, Cryptocotyle и других паразитов через необезвреженную рыбную продукцию.

3.2. Объектами санитарно-паразитологических исследований являются промысловые пресноводные и морские рыбы, моллюски, ракообразные, земноводные, пресмыкающиеся и продукты их переработки. Среди паразитов, встречающихся в рыбе и других гидробионтах, опасными для здоровья человека являются личинки гельминтов: цестод, трематод, нематод и скребней.

3.3. Опасность для здоровья человека представляют только живые личинки гельминтов. В связи с этим, при паразитологической экспертизе гидробионтов и продуктов их переработки следует определять жизнеспособность выявленных плероцеркоидов, метацеркарий, личинок нематод и скребней.

3.4. Потенциальными носителями личинок возбудителей описторхоза являются следующие виды рыб семейства карповых:

- язь, елец, плотва, лещ, линь, пескарь, уклея, гольян, верховка (для Сибири, Урала, бассейны рек Оби, Иртыша, Урала, Енисея);

- лещ, голавль, синец, белоглазка, чехонь, жерех, линь, язь, елец, плотва, красноперка, пескарь, уклея, гольян, верховка, подуст, шиповка (для европейской части РФ, бассейны рек Волги, Камы, Дона, Днепра, Северной Двины).

3.5. Потенциальными носителями личинок возбудителей клонорхоза являются многочисленные виды рыб преимущественно семейства карповых бассейнов рек Уссури и Амура (среднего и нижнего течения): калуга, амурский осетр, сибирская щиповка, лептобоция Манчжурская, горчак лайта, горчак обыкновенный, белый амур, черный амур, золотой карась, серебряный карась, амурский сазан, уклей, амурский чебак, гольян Лаговского, белый толстолобик, пестрый толстолоб, амурский чебачок, псевдорасбора, желтощек, горбушка, верхогляд, сибирский пескарь, длиннохвостый колючий пескарь, конь-губарь, пестрый конь, амурский лжепескарь, пескарь-лень, подуст-чернобрюшка, змееголов, ротан-головешка, сом Солдатова, косатка-скрипун, косатка-плеть, малая синяя косатка, речная корюшка.

3.6. Потенциальными носителями личинок возбудителей метагонимоза являются: чебак, карась, сазан, верхогляд, пескарь, толстолобик, белый амур, черный амур, конь-губарь, пестрый конь, востробрюшка, подуст и др. Метацеркарии метагонимусов часто обнаруживаются у сига, хариуса и ленка (бассейны рек Уссури и Амура)

3.7. Потенциальными носителями личинок возбудителя нанофиетоза являются рыбы семейств хариусовых и лососевых (хариус, сима, ленок, таймень, кета, горбуша) в бассейнах рек нижнего Приамурья, Приуссурья и северного Сахалина. Встречается возбудитель и у представителей семейств карповые (елец, верхогляд, гольян) и щуковые (щука) в реках Приамурья и Приморья.

3.8. Потенциальными носителями личинок возбудителей дифиллоботриозов являются следующие виды рыб:

3.8.1. Плероцеркоидов D. latum - щука, налим, окунь, ерш, судак.

3.8.2. Плероцеркоидов D. dendriticum - пелядь, омуль, сиг, голец, муксун, чир, лосось, тугун, форель, хариус, горбуша, семга, кумжа, ряпушка, таймень, кижуч, ленок, корюшка, щука, налим, колюшка трехиглая, колюшка девятииглая.

3.8.3. Плероцеркоидов D. klebanovskii (D. luxi) - дальневосточные лососевые: кета, горбуша, кунджа, сима, сахалинский таймень.

3.9. Потенциальными носителями личинок сем. Anisakidae и других, опасных для человека и животных гельминтов морской фауны (Diplogonoporus grandis, Pyramicocephalus phocarum, Cryptocotyle lingua, Corynosoma strumosum, и др.) являются представители более 20 семейств промысловых морских рыб, ракообразных и моллюсков, в том числе нототения, скумбрия, тунцы, сардины, кета, горбуша, гольцы, сельдь, треска, салака, ставрида, пикша, морские окуни, камбала, рыба-сабля, кальмары, креветки и др.

3.10. Потенциальными носителями личинок возбудителей сем. Paragonimidae являются ракообразные (раки, крабы, креветки) из пресноводных водоемов Приморского края, бассейна Амура, водоемов КНР, полуострова Корея, Японии, стран юго-восточной Азии, Шри-Ланки, Центральной Америки, Либерии, Нигерии, Камеруна, Мексики, Перу, Филиппин.

4. Отбор, хранение и подготовка к исследованию проб гидробионтов и продуктов их переработки

4.1. Отбор и объем проб рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки для исследования по паразитологическим показателям на соответствие требованиям безопасности для здоровья человека осуществляется в соответствии с требованиями нормативной документации

4.2. Каждую пробу снабжают этикеткой, опечатывают или пломбируют.

На этикетку наносят:

- адрес и наименование изготовителя;

- наименование продукции;

- сорт или категорию продукции (при их наличии);

- дату, время и место отбора пробы;

- срок и условия хранения пробы до испытаний;

- номер пробы;

- номер и дату акта отбора пробы;

- обозначение документа, в соответствии с которым изготовлена продукция (при наличии), договора (контракта).

4.3. В случае возникновения разногласий в оценке качества и безопасности продукции или при отборе проб продукции длительного хранения, а также по требованию заинтересованной стороны должен быть произведен отбор удвоенного количества средней пробы, одну часть которой направляют на испытания, а вторую оставляют.

4.4. Вторая проба должна быть опечатана или опломбирована и должна храниться в соответствии с требованиями документа, по которому данная продукция изготовлена, до получения результатов испытаний в аккредитованной лаборатории, проводящей испытания.

4.5. Поступившую на испытания пробу регистрируют в лабораторном журнале, указывая следующие данные:

- номер пробы;

- дату отбора и поступления пробы;

- наименование предприятия, направившего пробу;

- состояние пробы при получении (наличие упаковки, печати, пломбы);

- наименование продукции, от которой взята проба, и соответствие параметров пробы данным, приведенным в акте и на этикетке;

- цель направления пробы.

4.6. После окончания исследований пробы в рабочий журнал записывают результаты и его оценку.

4.7. На основании проведенных испытаний оформляют протокол исследований.

4.8. Хранить свежих или охлажденных гидробионтов и продуктов их разделки до исследования следует в холодильнике при температуре 2 - 4°С. Замороженная рыбопродукция (сырье, полуфабрикаты и готовые изделия) до исследования хранится при температуре и в условиях согласно нормативно-технической документации на нее.

4.9. Непосредственно перед исследованием мороженую рыбную продукцию размораживают до температуры не ниже 0°С в толще тела рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки. Живых ракообразных усыпляют.

4.10. При исследовании вяленой, соленой и копченой рыбы ее предварительно вымачивают в течение суток до размягчения мышц, меняя воду каждые 4 - 6 ч.

4.11. Соленую икру (зернистую, паюсную, ястыковую) выдерживают в воде в течение 2 ч. Другие виды рыбной продукции (пресервы, жареная рыба, фарш и пр.) специальной подготовки не требуют и сохраняются в холодильнике до начала исследования.

4.12. О видовой принадлежности исследуемого образца судят по документам, сопровождающим пробу. При поступлении гидробионтов в виде, не позволяющем произвести видовое определение, следует его уточнить.

5. Оборудование реактивы Микроскоп бинокулярный типа МБС Микроскоп биологический типа МИКМЕД Окуляр-микрометр для светового микроскопа Окуляр-микрометр для бинокулярного микроскопа Объект-микрометр Весы лабораторные с набором разновесов (или весы электронные) Холодильник бытовой электрический Термостат Кюветы эмалированные Ножницы медицинские Пинцеты медицинские Иглы препаровальные разной толщины Скальпель хирургический Лупа Источник постоянного тока (элемент питания 1,5 В) Сантиметр или линейка Лабораторная посуда и материалы Бюксы разных размеров Пробирки ГОСТ 1774-74 Цилиндры мерные (0,5-0,25 л) ГОСТ 1774-74 Колбы номинальной вместимостью 200, 400, 1000, 1600 см Банки стеклянные с притертой пробкой для хранения реактивов (0,1, 0,25, 0,5 л) Стекла предметные для микропрепаратов ГОСТ 9284-85 Стекла предметные (6-8х12-15 см, толщиной 3-5 мм) Стекла покровные для микропрепаратов ГОСТ 6672-85 Стекла часовые Ситечки с ячеей 1 х 1 мм Чашки биологические (Петри) ГОСТ 23932-90 Химические стаканы ГОСТ 25336-82 Пипетки стеклянные (пастеровские) Пипетки вместимостью 1-10 см ГОСТ 29227-91 Груши резиновые Воронки стеклянные разных размеров ГОСТ 25336-82 Спиртовка лабораторная стеклянная Термометр жидкостный (не ртутный) Бумага фильтровальная Вата медицинская гигроскопическая

Марля медицинская Проволока медная

Реактивы Глицерин ГОСТ 6259-75 Вода дистиллированная Желчь сухая или желчь нативная сельскохозяйственных животных Калия гидроокись Калий хлористый Кальций двухлористый Кислота соляная ГОСТ 3118-77, изм.1 Натрия гидроокись ГОСТ 4328-77 Натрий хлористый Натрий углекислый Нейтральный красный (нейтраль-рот) Метиленовый синий Молочная кислота Пепсин Раствор физиологический Розоловая кислота (аурин) Спирт этиловый ректификованный Трипсин Формалин Хлороформ Эфир

6. Оценка паразитологического состояния водоема

6.1. При оценке паразитологического состояния водоема (района промысла) следует начинать исследовать виды гидробионтов, наиболее подверженные заражению.

Наилучшими индикаторами неблагополучия водоема в отношении инвазии личинками O.

felineus является язь, далее по убывающей - елец, плотва, лещ и т.д., в отношении Diphyllobothrium latum - щука и налим. Для исследования на наличие метацеркарий O.

felineus и плероцеркоидов D. latum целесообразнее отбирать рыб старших возрастов, т.к.

их число увеличивается с возрастом рыб. Метацеркарии Metorchis bilis (albidus) чаще встречаются у сеголеток и рыб младших возрастов, а Echinochasmus perfoliatus преимущественно у мальков.

6.2. До начала исследования рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных и пресмыкающихся следует точно определить видовую принадлежность исследуемого экземпляра, определить, потенциальными носителями каких видов гельминтов, опасных для здоровья человека, он является. Следует помнить, что один и тот же вид позвоночного или беспозвоночного может служить дополнительным или резервуарным (факультативным) хозяином для нескольких видов гельминтов.

6.3. Перед исследованием рыбу (или нерыбный объект промысла) отмывают от слизи, протирают, взвешивают, измеряют длину и делают в журнале записи, касающиеся учета исследований.

6.4. Для определения возраста у рыб с циклоидной чешуей последнюю берут с переднебоковой поверхности выше боковой линии в количестве 15-20 крупных чешуек. У рыб с ктеноидной чешуей, а также с голой кожей берут отолиты или колючий шип грудного плавника.

6.5. Для исследования на наличие метацеркарий Metagonimus yokogawai и Metagonimus katsuradai отбирают по 20 чешуек из разных частей тела рыбы в спинной области, у карася

- вдоль боковой линии. Крупные чешуйки (у сазанов, карасей) перед исследованием просветляют в течение 15 - 20 мин в 50%-ном растворе глицерина.

6.6. Перед исследованием живых раков и крабов рекомендуется поместить в кипящую воду на 0,5 - 1,5 мин (в зависимости от размеров ракообразных) до прекращения движения или усыпить их эфиром (хлороформом).

–  –  –

7.1.1. При исследовании рыбной продукции используют два основных подхода:

- выявление личинок гельминтов, видимых невооруженным глазом (плероцеркоиды, акантеллы (личинки скребней), личинки нематод размером более 2 мм), путем тщательного осмотра всех органов, полостей и тканей промежуточных (или резервуарных) хозяев;

- выявление личинок гельминтов, плохо или не видимых невооруженным глазом (в основном метацеркарий трематод и мелких нематод), путем исследования органов и тканей - мест наиболее вероятной их локализации, с использованием оптических средств.

Уточнение видовой принадлежности личинок гельминтов в обоих случаях ведется с применением световых микроскопов типа МБС, Микмед или др.

7.1.2. Порядок исследования и необходимость проведения всех или только отдельных его этапов зависит от вида (видов) гельминта (его личинок), встречающегося в исследуемом гидробионте, типичной локализации личинок в нем и вида продукции.

7.1.3. На наличие метацеркарий большинства видов трематод исследуют только верхний слой мышечной ткани и подкожную клетчатку в области спинных мышц. Для обнаружения метацеркарий Metagonimus yokogawai и Metagonimus kalsuradai в первую очередь исследуют чешую, Echinochasmus perfoliatus -жабры, Apophallus muhlingi и Rossicotrema donicum - ткани плавников, Nanophyetus salmincola - почки.

7.1.4. Мороженую, соленую, пряную, маринованную, вяленую, сушеную и копченую рыбную продукцию после предварительного вымачивания исследуют по методике неполного гельминтологического вскрытия. При обнаружении личинок гельминтов определяют их жизнеспособность.

7.1.5. Продукты переработки рыбы (пресервы, фарш, жареная или заливная рыба) предварительно осматривают, а затем исследуют компрессорным методом или методом переваривания в искусственном желудочном соке.

7.1.6. Рыбу потрошеную обезглавленную, разделанную на тушку, спинку, кусок и филе, лапки земноводных, мышечные ткани и мантию двустворчатых моллюсков, а также мантию головоногих в зависимости от целей паразитологической экспертизы (вида гельминта) исследуют по одной из предложенных методик исследования мускулатуры.

7.1.7. Икру (гонады), как свежую, так и продукты ее переработки, исследуют в соответствии с методикой. Молоки (семенники) тщательно осматривают снаружи на наличие полостных паразитов. Внутри молок опасные для здоровья человека личинки паразитов отсутствуют.

–  –  –

7.2.1. Рыбу вскрывают в большой эмалированной кювете или на широкой гладкой доске.

Прежде всего, проводят наружный осмотр рыбы для выявления личинок, просвечивающих через кожу, извлекают их препаровальной иглой.

7.2.2. Затем вырезают левую стенку полости тела и открывают доступ к последней. Для этого, повернув рыбу брюхом кверху, делают короткий надрез вперед от анального отверстия, куда затем вводят тупой конец ножниц и разрезают рыбу вдоль срединной линии брюшка до угла нижней челюсти. Делают дугообразный надрез, вырезают левую брюшную стенку, отделяют ее. Рыбу кладут на правый бок. При внимательном осмотре полости тела и внутренних органов могут быть обнаружены свободно лежащие или под серозной оболочкой, или в капсулах личинки цестод, нематод, скребней, видимые невооруженным глазом.

7.2.3. Накладывают лигатуры на кишечник близ анального отверстия и на пищевод в его начальном отделе, чтобы содержимое пищеварительного тракта не вышло наружу. Затем извлекают внутренние органы. Вырезают яичники (икру) или семенники (молоки), помещая их в отдельные чашки Петри, и просматривают. Осматривают плавательный пузырь снаружи и внутри. Вырезают и осматривают сердце, а также сердечную полость.

Компрессорным способом исследуют содержимое, оставшееся в полости тела. Полость протирают марлевой салфеткой, соскабливают брюшину.

7.2.4. Проводят препарацию органов пищеварительной системы. Выделяют желчный пузырь, лежащий на поверхности печени, так, чтобы его содержимое (в том числе и паразиты) не залило остальные внутренние органы. Затем выделяют пищеварительный тракт, печень, селезенку, поджелудочную железу. Эти органы отделяют друг от друга и от окружающей их жировой ткани и осматривают. Жировую ткань разрезают на тонкие пластинки толщиной около 3 мм или исследуют компрессорно между стеклами на темном фоне или в полупроходящем свете. Исследуют освобожденный от жировой ткани пищеварительный тракт, отыскивая личинок в капсулах на его поверхности или просвечивающих через серозные покровы (Diphyllobothrium dendriticum, Diphyllobothrium latum, Dioctophyme renale, Eustrongylides exicisus, Corynosoma strumosum, Corynosoma semerse, Bolbosoma caenoforme, личинки сем. Anisakidae). Пилорические придатки (развитые у налима, сиговых, лососевых) расправляют и осматривают снаружи (Pyramicocephalus phocarum). Стенки желудка и пищевода после наружного осмотра исследуют под бинокулярным стереоскопическим микроскопом.

7.2.5. При наружном осмотре печени невооруженным глазом можно заметить плероцеркоиды цестод (Diphyllobothrium latum, Pyramicocephalus phocarum, Eustrongylides exicisus) и личинки анизакид. Поджелудочную железу, селезенку, печень осматривают снаружи и также разрезают на пластинки толщиной около 3 мм.

7.2.6. У яичника разрезают оболочку, содержимое соскабливают и компрессуют (могут быть обнаружены плероцеркоиды Diphyllobothrium latum). Компрессорным методом просматривают только мелкую икру. При исследовании крупных икринок следует разбирать их препаровальными иглами в чашке Петри с небольшим добавлением воды.

7.2.7. Почки соскабливают и по частям исследуют компрессорным способом, добавляя несколько капель воды. Почки - орган наиболее вероятной локализации метацеркарий Nanophyetus salmincola.

7.2.8. Плавники просматривают под микроскопом (МБС) в небольшом количестве воды.

Могут быть заметны в виде маленьких черных точек пигментированные цисты Apophallus muhlingi и Rossicotrema donicum, а также метацеркарии Metagonimus yokogawai и Metagonimus katsuradai. Мышцы плавников исследуют компрессорным способом.

7.2.9. Снимают жаберную крышку и ножницами вырезают все жаберные дуги. Их по очереди рассматривают в чашке Петри под бинокуляром, перебирая лепестки препаровальными иглами и, следя за тем, чтобы они были покрыты водой. Затем отрезают от дуги лепестки у их основания и, разбирая препаровальными иглами, выявляют паразитов, оставшихся незамеченными. На жабрах можно обнаружить метацеркарий Echinochasmus perfoliatus, Metagonimus yokogawai, Metagonimus katsuradai, Nanophyetus salmincola, Opisthorchis felineus.

7.2.10. После просмотра внутренних органов с рыбы снимают кожу в направлении от головы к хвосту, подрезая ее ножницами и оттягивая хирургическим пинцетом или рукой.

Осматривают внутреннюю сторону кожи, а часть мышц, отделившихся с кожей, разрезают на пластинки или соскабливают и компрессуют.

7.2.11. При экспертизе земноводных и пресмыкающихся исследуют полость тела, органы и ткани, включая мускулатуру.

7.2.12. Двустворчатые моллюски. Для раскрытия раковины скальпель вводят между створками и разрезают мускул-замыкатель. Из открытой раковины, надрезав мантию в передней ее части, сливают мантийную жидкость. Между одной из створок и прилегающей к ней мантийной складкой вводится плоская ручка скальпеля. Двигая ее по краю створки вперед и назад, сначала отделяют край мантии, прикрепленный к створке, затем передний и задний мускулы-замыкатели (аддукторы). На следующем этапе отделяют мантию и аддукторы от другой створки, после чего раковина легко удаляется. У гребешков и устриц аддуктор один и находится в середине тела, несколько ближе к заднему краю.

7.2.13. Вынутое из раковины тело моллюска помещают в кювету (или чашку Петри) с водой. Осматривают мантию и просвечивающие в спинной части тела через полупрозрачную кожу - внутренние органы: печень, лежащую непосредственно позади переднего аддуктора или на спинной стороне над аддуктором (у гребешков и устриц), перикардий и граничащие с задним аддуктором почки. Обнаруженных личинок нематод извлекают препаровальной иглой.

7.2.14. Мантийные складки отрезают и просматривают на просвет или компрессорно.

Затем отрезают и осматривают жабры.

7.2.15. Отпрепаровывают гонады, залегающие в спинной части ноги. Они расчленены и слагаются из многочисленных мелких долек, окружающих петлю кишечника. Гонады исследуют компрессорным способом. Здесь наиболее вероятно обнаружение личинок Echinocephalus sinensis и Sulcascaris sulcata. Затем выделяют пищеварительную систему и исследуют таким же образом.

7.2.16. Аддукторы и ногу исследуют так же, как мускулатуру у рыб. Аддуктор гребешков место наиболее вероятной локализации Sulcascaris sulcata.

7.2.17. Выявленных личинок помещают в чашку Петри или часовое стекло с физиологическим раствором для дальнейшего определения вида паразита.

7.2.18. Головоногие моллюски. У кальмаров и каракатиц разрезается мантия на брюшной стороне. Разрез делают ножницами или скальпелем по срединной линии, начиная от края мантии, до основания плавника. При этом стараются не повредить чернильный мешок. У осьминогов, кроме того, разрезают мускулистую продольную перегородку, открывая доступ в мантийную полость. Отгибают стенки мантии и осматривают внутренности.

Последовательно отделяют жабры, гонады, пищеварительную систему. Внутренние органы исследуют компрессорно. Особое внимание обращают на гонаду, где возможно обнаружение личинок нематод рода Anisakis. Освобожденную от внутренних органов мантию исследуют аналогично мышечной ткани рыб - на просвет или методом параллельных разрезов. На внутренней стороне мантии, в пленках встречаются личинки нематод родов Anisakis и Contracaecum.

7.2.19. Ракообразные. При экспертизе пресноводных крабов и раков на наличие метацеркарий парагонимид в первую очередь исследуют мышцы грудного отдела и сердце, как места наиболее вероятной локализации личинок (до 90% случаев). Для этого у ракообразных ножницами срезают карапакс, затем с помощью скальпеля вырезают мышцы грудного отдела. Из задней части грудного отдела вычленяют сердце, со стороны головогруди срезают жабры, все исследуют, используя компрессорный метод.

7.2.20. Для выделения мяса из абдомена, последний отрезают от груди и ножницами разрезают панцирь от верхнего края "шейки" до тельсона (хвостового веера). Конечности (у крабов и раков) разрезают на части (поперек) вблизи кожистых суставов, одновременно разрезая хитиновую пластинку, прикрепленную к суставу. Панцирные трубки разрезают вдоль и извлекают мясо. Клешню разбивают резким и сильным ударом деревянного молотка. Всю мышечную ткань просматривают компрессорным методом или методом переваривания в искусственном желудочном соке.

–  –  –

7.3.1. Метод применяется для обнаружения в мышечной ткани рыбы личинок гельминтов, видимых без использования увеличительных приборов (цестод, нематод, скребней).

7.3.2. Мышечную ткань острым скальпелем разрезают на пластинки толщиной до 5 мм, которые затем раздвигают и просматривают в падающем свете невооруженным глазом.

Разрезы можно делать как поперек, так и вдоль мышечных волокон. Делая разрезы мускулатуры, и встречая в ее толще крупных личинок или капсулы с личинками (величиной около 1 см и более), извлекают несколько экземпляров паразитов целиком для определения вида.

7.3.3. Выделенных личинок помещают в чашку Петри или часовое стекло с физиологическим раствором.

7.3.4. При исследовании тихоокеанских лососей, кунджи и сахалинского тайменя на наличие плероцеркоидов Diphyllobothrium luxi (D. klebanovskii) разрезы проводят поперек мышечных волокон всей дорсальной части тела, большинство личинок локализуется между жировым и спинным плавниками.

7.4. Компрессорный метод

7.4.1. Метод применяется в основном для выявления метацеркарий трематод. Используют метод при просмотре мышечной ткани и внутренних органов рыб, а также мышечной ткани ракообразных. Возможно его использование при исследовании внутренних органов рыб на наличие личинок нематод и цестод.

7.4.2. Компрессорному исследованию подвергают органы и участки мышечной ткани наиболее вероятной локализации метацеркарий (табл.2).

7.4.3. Участок тела наиболее вероятной локализации метацеркарий освобождают от чешуи, затем скальпелем надрезают кожу по средней линии спины и двумя надрезами от первого надреза до боковой линии выделяют участок средней трети спины. Кожу с вычлененного участка поднимают пинцетом и с помощью скальпеля отделяют ее так, чтобы подкожная клетчатка осталась на поверхности мышц. Острым скальпелем соскабливают или срезают тонкие пластинки поверхностного слоя мышц, толщиной не более 2 - 3 мм, размещают их на нижнем стекле компрессория, накрывают другим стеклом и сдавливают их.

7.4.4. Срезы просматривают с помощью микроскопа типа МБС. Для уточнения диагноза кусочки тканей с личинками переносят на предметные стекла, накрывают покровными и исследуют при большем увеличении с помощью микроскопа типа Микмед.

7.4.5. При обнаружении личинок ограничиваются просмотром мышц с одной стороны тела. При отсутствии личинок необходимо просмотреть срез и с другой стороны.

7.4.6. При исследовании молоди рыб длиной до 20 - 25 мм их компрессуют целиком.

Более крупных сеголеток распластывают на две половинки и просматривают в компрессории со стороны разреза, не снимая кожи и не освобождая от чешуи.

7.4.7. Подсыхающие срезы, препараты увлажняют водой или физиологическим раствором из пипетки.

7.5. Метод переваривания в искусственном желудочном соке 7.5.1. Метод используется для выделения метацеркарий трематод, реже личинок нематод.

Он также эффективен при исследовании продуктов переработки гидробионтов (фарша, пресервов).

7.5.2. Метод основан на том, что в кислой среде метацеркарии освобождаются от наружной оболочки, а окружающая их мышечная ткань переваривается в искусственном желудочном соке.

7.5.3. Приготовление искусственного желудочного сока. На 1000 мл дистиллированной воды (при ее отсутствии можно использовать кипяченую остывшую до температуры 37 С водопроводную воду) добавляют 7 г пепсина, 9,0 г поваренной соли и 10 мл концентрированной соляной кислоты.

7.5.4. Для выделения метацеркарий трематод берут подкожную мышечную ткань (до 0,5 см), а мелких личинок нематод - всю мышечную ткань. Ее отделяют от кожи, измельчают ножом или в мясорубке (при выделении личинок Nanophyetus salmincola используют дополнительно и почки). Затем ее заливают в соотношении 1:10 приготовленным искусственным желудочным соком (1 часть фарша и 10 частей искусственного желудочного сока). Пробу помещают в термостат на 3 ч при температуре 36 - 37°С, периодически помешивая стеклянной палочкой.

7.5.5. Содержимое фильтруют в стеклянные цилиндры через металлический фильтр с размером ячеек 1 х 1 мм или однослойный бинт. После отстаивания (15 - 20 мин) верхний слой желудочного сока с переваренной мышечной тканью сливают, а осадок переносят в чашку Петри (или глубокое часовое стекло) и микроскопируют.

7.5.6. Для лучшего отделения личинок в чашку Петри наливают физиологический раствор, делают несколько круговых движений, в результате которых метацеркарии концентрируются в центре чашки Петри (часового стекла), а излишки физиологического раствора с остатками мышечной ткани удаляют пипеткой. Процедуру повторяют до полного исчезновения остатков не переваренной мышечной ткани.

7.5.7. Метацеркарии трематод, выделенные этим способом из свежей рыбы, сохраняют свою структуру и жизнеспособность в физиологическом растворе в течение 10 - 24 ч при температуре 20 - 25°С и 5 - 7 дней при температуре 1 - 4°С.

8. Методы установления жизнеспособности личинок гельминтов При обнаружении личинок в рыбной продукции, в том числе при оценке эффективности ее обеззараживания, необходимо определить их жизнеспособность.

8.1. По морфологическим признакам и двигательной активности 8.1.1. Личинок цестод, нематод и скребней помещают в чашку Петри или часовое стекло с подогретым физиологическим раствором (37 - 40°С) и рассматривают под микроскопом типа МБС при увеличении, соответствующем размеру личинки или ее рассматриваемой части. Инцистированных личинок извлекают из оболочек. Живые личинки могут не проявлять признаков активности. Их движения можно стимулировать с помощью физического раздражения, уколов личинку острой препаровальной иглой. У живой личинки уколы вызывают сокращение тела. Личинок анизакид (в физиологическом растворе) помещают на 2 ч в термостат с t = 37°C. Изменение цвета, отслоение покровов, другие деструктивные изменения тела указывают на нежизнеспособность личинок. Если видимых изменений нет, но и признаков жизни обнаружить не удается, то применяют метод химического воздействия.

8.1.2. Метацеркарий трематод, выделенных из тканей рыбы (или ракообразных) с помощью препаровальной иглы, помещают в каплю теплой воды или физиологического раствора (37 - 40°С) на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под малым и большим увеличением микроскопа. Явное нарушение целости оболочек цист, грубые изменения внутреннего строения личинки, распад ее содержимого, разрушение экскреторного пузыря являются признаками гибели метацеркарий.

Метацеркарии обладают способностью совершать движения, находясь в цисте. Наличие даже самых слабых самостоятельных движений личинки свидетельствует о ее жизнеспособности. Отсутствие движения еще не свидетельствует о гибели. Движение можно стимулировать слабым придавливанием метацеркарий покровным стеклом.

–  –  –

8.2.1. Применим только к личинкам нематод, цестод и скребней. Личинок помещают на мокрую фильтровальную бумагу и воздействуют на них слабым постоянным электрическим током (0,5 - 1,5 В), пропускаемым через личинку. Для этого два тонких изолированных провода от положительного и отрицательного полюсов элемента (источника постоянного тока) проводятся к двум препаровальным иглам. Проявление сократительных движений контролируют под микроскопом типа МБС.

8.3. Метод химического воздействия (с использованием химических раздражителей) 8.3.1. Вызвать движение личинок можно, воздействуя дуоденальным содержимым, полученным при зондировании человека, либо желчью животных, либо трипсином. В основном метод применяют для определения жизнеспособности метацеркарий трематод.

8.3.2. На выделенных метацеркарий наносят несколько капель химического реагента так, чтобы полностью покрыть личинок. Для ускорения эксцистирования предметное (часовое) стекло с личинками можно слегка подогреть над пламенем спиртовки, или внести предварительно подогретый до 37 - 40°С трипсин (или желчь), либо поставить в термостат при 37°С на 10 мин. Через несколько секунд под воздействием химического раздражителя начинается выход личинок из цист и их активное движение, что служит показателем жизнеспособности. Процесс эксцистирования личинок контролируют под микроскопом типа МБС. Отсутствие в течение 30 мин всякой двигательной реакции свидетельствует о гибели личинок.

8.3.3. Для определения жизнеспособности личинок нематод из рыбы (моллюсков), подвергнутых ранее замораживанию или холодному копчению, гельминтов инкубируют в термостате при 37°С в физиологическом растворе или 0,5%-ном растворе трипсина.

Личинок инкубируют в течение трех дней, ежедневно проверяя их жизнеспособность.

8.4. Метод флюоресценции (с использованием ультрафиолетового света) 8.4.1. Метод основан на способности живых и мертвых тканей флюоресцировать под воздействием ультрафиолетового света. Метод применим в основном к личинкам нематод.

8.4.2. Куски мышц рыбы (или кальмаров) или филе толщиной не более 2 см облучают ультрафиолетовым светом сначала с одной, а потом с другой стороны. При просмотре исследователь должен пользоваться защитными (синими) очками. Особенно интенсивно флюоресцируют мертвые гельминты в рыбопродукции, подвергнутой замораживанию.

Характер свечения у разных видов неодинаков: личинки Anisakis имеют голубоватобелую флюоресценцию (бледную у живых и яркую у мертвых); личинки р. Contracaecum от бледной (у живых) до ярко-желтой (у мертвых).

–  –  –

8.5.1. В зависимости от используемого красителя окрашиваются либо живые, либо мертвые личинки гельминтов.

8.5.2. Личинок нематод, цестод и скребней помещают в чашку Петри (или часовое стекло) с раствором метиленового синего (метиленовый синий - 0,05 г, натрий едкий - 0,5 г, молочная кислота - 15 мл). Мертвые личинки окрашиваются в синий цвет. Хорошо прокрашиваются нервные волокна и ядра клеток.

8.5.3. Живые плероцеркоиды окрашиваются водным раствором нейтраль-рота (0,1 г нейтрального красного разводят в 100 мл дистиллированной воды) в течение 5-20 мин, приобретая стойкую розовую окраску. Для контроля личинок извлекают из краски, помещают в чистый физиологический раствор и в нем просматривают степень окрашивания. Мертвые личинки не получают стойкой окраски.

8.5.4. Для определения жизнеспособности метацеркарий трематод используют окрашивание раствором розоловой кислоты (0,3 г розоловой кислоты растворяют в 100 мл 70° спирта). Кусочки мышц с личинками освобождают от жира. На ткань наносят 2 капли розоловой кислоты, а через 2 мин - 0,1 N раствора гидроокиси калия, равномерно распределяя его по ткани. Избыток жидкости с препарата снимают фильтровальной бумагой. Накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Ткань рыбы окрашивается в розовый цвет, живые личинки совершенно не окрашиваются, а мертвые становятся розовыми.

9. Методы фиксации и хранения личинок паразитов

9.1. Для фиксации желательно брать живых личинок гельминтов. Перед фиксацией паразитов следует осторожно отделить от окружающих тканей (метацеркарий трематод и мелких личинок нематод предпочтительнее с помощью метода переваривания в искусственном желудочном соке). Перед погружением в фиксирующую жидкость для отделения личинок от крови, слизи и других загрязнений, а также при необходимости их расправления личинок цестод и скребней следует поместить в воду, а личинок трематод и нематод в физиологический раствор или раствор Рингера (хлористый натрий -0,65 г, хлористый калий - 0,025 г, карбонат натрия - 0,02 г, двухлористый кальций - 0,03 г, бидистиллированная вода - 100 мл. Соли растворяют в указанном порядке) на 15 - 30 мин.

9.2. Объем фиксатора должен превышать объем фиксируемого материала в 20 - 40 раз.

9.3. Личинок цестод, трематод, скребней фиксируют в 70°-ном спирте. Для того чтобы хоботок у скребней и сколекс у цестод оставался в вывернутом состоянии, применяют способ осторожного, но достаточно сильного сдавливания червей между стеклами, подпуская пипеткой спирт 80° крепости. Избыток фиксирующей жидкости оттягивают фильтровальной бумагой со стороны, противоположной пипетке. Выдерживают 15-20 мин. Затем стекло осторожно приподнимают, и личинку переносят в 70° спирт.

9.4. Личинок круглых червей рекомендуется фиксировать и хранить в жидкости Барбагалло (4% раствор формалина в физиологическом растворе). Чтобы тело личинки при фиксации не скручивалось, рекомендуется фиксация горячей (до 70°С) жидкостью Барбагалло.

10. Регистрация результатов исследований рыбной продукции

10.1. Результаты исследований вносятся в лабораторный журнал, где отмечаются следующие сведения:

- дата доставки и исследования

- место отлова рыбы, моллюсков, ракообразных и т.д.: административная территория, водоем или место изготовления продукции (предприятие-изготовитель);

- видовое (родовое) название исследуемого экземпляра;

- вид рыбной продукции (свежая, мороженая, филе, фарш, консервы и т.д.);

- масса пробы;

-порядковый номер исследуемого экземпляра;

-методы паразитологического исследования;

-вид обнаруженных личинок и их число;

-место локализации личинок (органы и ткани);

-жизнеспособность личинок.

–  –  –

1(2) Метацеркарии локализуются в различных тканях ракообразных.....

2 (1) Метацеркарии локализуются в различных тканях рыб 3 (4) Передний конец тела вооружен шипами

4 (3) Передний конец тела не несет шипов 5 (8) Ветви кишечника длинные, до конца тела 6 (7) Ветви кишечника прямые. Шипиков вокруг ротового отверстия нет.

Брюшная присоска, как правило, крупнее ротовой. Предглотки нет.

Выделительный пузырь большой, темный

7(6) Концы ветвей кишечника более или менее загибаются внутрь, к срединной линии тела. Предглотка имеется

8(5) Ветви кишечника короткие не переходят за уровень заднего края зачатков семенников

4.2.2. К сем. Opisthorchidae относятся трематоды с удлиненным, сплющенным и всегда заметно суженным кпереди телом. Присоски сравнительно слабо развиты и сближены. Ветви кишечника длинные, пищевод разной длины.

Во взрослом состоянии - паразиты желчных протоков печени, желчного пузыря и поджелудочной железы млекопитающих, птиц, рептилий.

1(2) Циста с толстой оболочкой, сферическая

2(1) Циста тонкостенная, сферическая или овальная 3(6) Пищевод длинный, развилок кишечника удален от ротовой присоски 4(5) Шипики по всему телу. Желто-коричневая пигментация тела.

Ротовая присоска меньше брюшной............ Clonorchis sinensis (рис.11) 5(4) Шипики до заднего края брюшной присоски*(4). Тело не пигментировано. Ротовая и брюшная присоски примерно равны по величине

6(3) Пищевод короткий, развилок кишечника приближен к ротовой присоске 7(8) Тело покрыто шипиками, немного не доходящими до заднего конца тела. Брюшная присоска крупнее ротовой

8(7) Шипики до уровня заднего края брюшной присоски. Присоски одинакового размера

4.2.3. К сем. Heterophyidae относятся мелкие трематоды с телом, покрытым чешуеобразными шипиками, число которых уменьшается к заднему концу. Присоски слабо развиты. У видов, имеющих медицинское значение ротовая присоска без шипов. Зачатки семенников в заднем конце тела, обычно на одном горизонтальном уровне или слегка наискось. На брюшной стороне имеется более или менее сильно развитая впадина - генитальный синус, в котором бывает скрыта редуцированная брюшная присоска. Имеется половая присоска, которая часто объединяется с брюшной в общий комплекс.

Обычно паразиты кишечника рыбоядных птиц и млекопитающих. Случаи заражения человека Heterophyes heterophyes описаны в Японии, Индии, Палестине, Египте, Тунисе. Заболевания человека, вызванные паразитированием Metagonimus yokogawai, регистрируются только в странах Юго-Восточной Азии и южной части Дальнего Востока РФ, в то время как в Европейско-Кавказской части ареала трематода обнаружена лишь у млекопитающих и птиц.

1(2) Экскреторный пузырь сердцевидный

2(1) Экскреторный пузырь иной формы (V-образной, Y-образной или мешковидной формы) 3(4) Половой синус сдвинут в сторону

4(3) Половой синус расположен медианно 5(8) Половая присоска представлена двумя более или менее выраженными сосочками впереди брюшной присоски 6(7) Предглотка длинная, пищевод достигает половины длины тела.

Преимущественно у карповых рыб Apophalus muehlingi (рис.15) 7(6) Предглотка короткая, пищевод не более 1/4 тела. Преимущественно у окуневых рыб

8(5) Половая присоска представлена одним сосочком, расположенным позади брюшной присоски

–  –  –

Рис.1-6. 1 - Diphylobothrium latum (с инвагинированным и эвагинированными сколексами); 2 - D. dendriticum; 3 - D. ditremum (в расслабленном и сокращенном состоянии); 4 - Pyramicocephalus phocarum (общий вид и головной конец); 5 - Spirometra erinacei-europaei (головной конец и общий вид); 6 - Corynosoma strumosum.

–  –  –

Рис.7-11. 7 - Opisthorchis filineus (личинка вне цисты и в цисте); 8 - Metorchis xanthosomus;

9 - М. bilis (M. albidus); 10 - Pseudamphistomum truncatum (личинка вне цисты и в цисте);

11 - Clonorchis sunensis (личинка вне цисты и в цисте). РП - ротовая присоска; П пищевод; ВК - ветви кишечника; БП - брюшная присоска; ЭП - экскреторный пузырь.

–  –  –

Рис.12-16. 12 - Metagonimus yokogawai (личинка вне цисты и в цисте); 13 - Heterophyes heterophyes; 14 - Rossicotrema donicum; 15 - Apophallus muchlingi; 16 - Cryptocotyle lingua.

ЗC - зачатки семенников.

–  –  –

Рис.17-22. 17 - Nanophyctus salmincola; 18 - Echinochasmus perfoliatus (личинка в цисте и вне цисты); 19 - Paragonimus westermani westermani; 20 - P. w. ichunensis (личинка вне цисты и в цисте); 21 - P. w. mexicanus; 22 - P. mexicanus. АД - адоральный диск.

–  –  –

Рис.23-26. 23 - Eustrongylides excisus, larva (головной конец и область перехода пищевода и кишечника); 24 - Dioctophyme renale, larva III (передний конец и область границы пищевода и кишечника); 25 - Echinocephalus sinensis, larva III (передний конец - вид сбоку и сверху); 26 - Glathostoma hispidum, larva III (головной конец и общий вид). НК - нервное кольцо; П - пищевод; ПЖ - пищеводная железа; К - кишечник.

Морфологическое строение личинок нематод

Рис.27-31. 27 - Anisakis simplex, larva III (головной конец и общий вид); 28 - F. schupakovi, larva III; 29 - Pseudoterranova decipiens, larva III (общий вид и головной конец); 30 Contraecum osculatum, larva III; 31 - Sulcascaris sulcata, larva III. ЛЗ - личиночный зуб; ЭП экскреторная пора; НК - нервное кольцо; П - пищевод; Ж - желудочек; ЖО - желудочный отросток; К - кишечник; KB - кишечный вырост.

–  –  –

1. Беэр С.А., Белякова Ю.В., Сидоров Е.Г. Методы изучения промежуточных хозяев возбудителя описторхоза. - Алма-Ата 1987 - 85 с.

2. Быховская-Павловская И.Е. Паразитологическое исследование рыб - Л., 1985. - 120 с.

4. Карасев А.Б., Митенев В.К., Довгалев А.С., Сергиев В.П. Гельминты Баренцева моря, опасные для здоровья человека. - Мурманск, 1997. - 32 с.



Pages:   || 2 |

Похожие работы:

«MI,IH OFPHAYKIT POC CVTVI @e4epanbuo rocyAapcrBeHHoe e yqpex(AeHlre 6roANerHo o6pasonareJrbuoe e BbrcrrreroupoS eccr4 HElnburo o6pason auvrfl. o o (yxru Hc Krr fi rocyAa p crBeH Hbr fi TexH Hrrec Kr.r yH r{Bep curer) fi (yrry) 'l$-,ffitfif,ID 6\hffiffi) p rro HayrrHofipa6ore oHHOfi AeflTenbHOCTH w{8* (( 'B. E. Kyreuon 2011it|AP IIPOTPAMMA BCTyrrr4TenbH oro 3K3aMeHa B acrll4paHTypy n o cleqr4€urbHocTu 05.21.01 TexsoJrorlrf, vrMarnr4Hbr Jreco3aroroBoK r4 JrecHofo xo3flficrsa IIo...»

«Петухова Г.А. Экология. Учебно-методический комплекс. Рабочая программа для студентов направления 221400.62 – управление качеством заочной формы обучения. Тюмень, 2015, 15 стр. Рабочая программа составлена в соответствии с требованиями ФГОС ВО с учетом рекомендаций и ПрООП ВПО по направлению и профилю подготовки. Рабочая программа дисциплины (модуля) опубликована на сайте ТюмГУ: экология [электронный ресурс] / Режим доступа: http://www.umk3.utmn.ru., свободный. Рекомендовано к изданию кафедрой...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБУ НАЦИОНАЛЬНЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ ОРГАНИЗАЦИЯ МЕРОПРИЯТИЙ ПО РАННЕМУ ВЫЯВЛЕНИЮ СЛУЧАЕВ УПОТРЕБЛЕНИЯ ПСИХОАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫХ УЧРЕЖДЕНИЯХ Методические рекомендации МОСКВА, 20 Методические рекомендации «Организация мероприятий по раннему выявлению случаев употребления психоактивных веществ в образовательных учреждениях» содержат в себе теоретические положения, отражающие современное состояние вопросов по ранней профилактике...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Филиал федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кемеровский государственный университет» в г. Прокопьевске (Наименование факультета (филиала), где реализуется данная дисциплина) Рабочая программа дисциплины (модуля) Международные валютные отношения (Наименование дисциплины (модуля)) Специальность 080107 Налоги и налогообложение (шифр, название специальности) Специализация...»

«Содержание 1. Цели и задачи освоения дисциплины 2. Место дисциплины в структуре ООП бакалавриата 3. Требования к результатам освоения содержания дисциплины 4 4. Содержание и структура дисциплины 8 4.1. Содержание разделов дисциплины 8 4.2. Структура дисциплины 4.3. Разделы дисциплины 1 4.4. Тематика семинарских занятий 14 4.5. Контрольные работы 4.6. Контрольное тестирование 5. Образовательные технологии 6. Оценочные средства для текущего контроля успеваемости и промежуточной 26 аттестации 7....»

«РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ «УТВЕРЖДАЮ»: Проректор по учебной работе Л.М. Волосникова 08.07. 2011г. Организация логопедической работы в дошкольных образовательных учреждениях Учебно-методический комплекс. Рабочая программа для студентов направления подготовки 050700.62 Специальное (дефектологическое) образование, профиль подготовки Логопедия, форма...»

«Управление образования и науки Тамбовской области Тамбовское областное государственное образовательное автономное учреждение дополнительного профессионального образования «Институт повышения квалификации работников образования» Тамбовское областное государственное бюджетное учреждение «Межрегиональный центр возрождения духовно-нравственного наследия «Преображение» Формирование системы духовно-нравственного развития и воспитания детей и молодежи в образовательных учреждения всех видов и типов...»

«150415 Сварочное производство Автор, название, место издания, издательство, год издания, учебной и Уровень, ступень образования, вид образовательной №п/п учебно-методической литературы программы(основная /дополнительная),направление подготовки, специальность, профессия, наименование предмета, дисциплины(модуля)в соответствии с учебным планом Русский язык: грамматика, текст, стили речи [Текст] = 10-11 класс : учебное пособие / А. И. Власенков, Л. М. Рыбченкова. 5-е изд. М. : Просвещение, БД.01...»

«ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ Методические рекомендации по подготовке к итоговому сочинению (изложению) для участников итогового сочинения (изложения) Москва ОГЛАВЛЕНИЕ 1. ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ УЧАСТНИКОВ ИТОГОВОГО СОЧИНЕНИЯ (ИЗЛОЖЕНИЯ) 4 2. ОСОБЕННОСТИ ФОРМУЛИРОВОК ТЕМ ИТОГОВОГО СОЧИНЕНИЯ 10 3. ОСОБЕННОСТИ ТЕКСТОВ ДЛЯ ИТОГОВОГО ИЗЛОЖЕНИЯ 12 4. ПРОВЕРКА ИТОГОВОГО СОЧИНЕНИЯ (ИЗЛОЖЕНИЯ) 16 5. ПРАВИЛА ЗАПОЛНЕНИЯ БЛАНКА РЕГИСТРАЦИИ И БЛАНКОВ ЗАПИСИ УЧАСТНИКОВ ИТОГОВОГО...»

«Содержание 1. Общие положения 1.1. Цель ООП.1.2. Срок освоения ООП.1.3. Трудоемкость ООП.1.4. Требования к абитуриенту 2. Характеристика профессиональной деятельности выпускника. 6 2.1. Область профессиональной деятельности выпускника. 6 2.2. Объекты профессиональной деятельности выпускника. 6 2.3. Виды профессиональной деятельности выпускника. 6 2.4. Задачи профессиональной деятельности выпускника. 8 3. Компетенции, формируемые в результате освоения ООП. 8 3.1. Матрица распределения...»

«СОДЕРЖАНИЕ 1. Общие положения.. 3 1.1. Основная образовательная программа высшего профессионального образования по направлению подготовки 030900.62 Юриспруденция. 3 1.2. Нормативные документы для разработки основной образовательной программы по направлению подготовки 030900.62 Юриспруденция. 3 1.3. Общая характеристика основной образовательной программы по направлению подготовки 030900.62 Юриспруденция. 1.4. Требования к абитуриенту.. 5 2. Характеристика профессиональной деятельности...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ УНИВЕРСИТЕТ ИТМО Л.А. Забодалова, Н.В. Яковченко СОВРЕМЕННЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ПРОМЫШЛЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА ПРОДУКТОВ НА МОЛОЧНОЙ ОСНОВЕ Учебно-методическое пособие Санкт-Петербург УДК 613.2/637.04 Забодалова Л.А., Яковченко Н.В. Современные направления промышленного производства продуктов на молочной основе: Учеб.метод. пособие. СПб.: Университет ИТМО; ИХиБТ, 2015. 40 с. Учебно-методическое пособие содержит методические указания по выполнению...»

«ДЕПАРТАМЕНТ ОБРАЗОВАНИЯ АДМИНИСТРАЦИИ ПУРОВСКОГО РАЙОНА МУНИЦИПАЛЬНОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ СРЕДНЯЯ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ ШКОЛА № 2 п.г.т. УРЕНГОЙ ПУРОВСКОГО РАЙОНА микрорайон 5, д. № 53а, п.г.т. Уренгой, Пуровский район, Ямало-Ненецкий автономный округ, 629860, тел. (34934) 9-27-45, факс 9-25-67. e-mail: Urengoy_2@mail.ru ОКПО 32733321, ОГРН 1028900859558, ИНН/КПП 8911012478/ 891101001, БИК 047191000 « 15 » мая 20 14 г. № 383/01на № 376 от «25» апреля_ 2014 г. Директору МКУ...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Московский государственный университет геодезии и картографии Факультет дистанционных форм обучения МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ Программа и контрольные работы № 5-7 по курсу «Высшая математика» Для студентов 2 курса всех специальностей Москва 2015 Составители: Т.М. Королева, Е.Г. Маркарян, Г.А. Суворченкова Контрольные работы написаны в соответствии с утвержденной программой курса «Высшая математика», рекомендованы кафедрой высшей математики,...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» Институт наук о Земле Кафедра геоэкологии Вешкурцева Татьяна Михайловна ОСНОВЫ ОКЕАНОЛОГИИ Учебно-методический комплекс. Рабочая программа для студентов направления 05.03.02 География очной формы обучения Тюменский государственный университет Вешкурцева Т.М. Основы океанологии. Учебно-методический...»

«В. Н. Виноградов, В. И. Вышнепольский ЧЕРЧЕНИЕ Методическое пособие к учебнику А. Д. Ботвинникова, В. Н. Виноградова, И. С. Вышнепольского «Черчение. 9 класс» класс АСТ • Астрель Москва УДК 372.8: ББК 74.263.01 В49 Виноградов, Виктор Никонович В49 Черчение : Методическое пособие к учебнику А.Д. Ботвинникова, В.Н. Виноградова, И.С. Вышне польского «Черчение. 9 класс» : 9 класс / В.Н. Вино градов, В.И. Вышнепольский. — Москва: АСТ: Аст рель, 2015. — 254, [2] с. ISBN 978 5 17 085399 1 (ООО...»

«Мониторинг регуляторной среды – 18 25 мая 2015 года Подготовлен Институтом проблем естественных монополий (ИПЕМ) Исследования в областях железнодорожного транспорта, ТЭК и промышленности Тел.: +7 (495) 690-14-26, www.ipem.ru Следите за нашими новостями и публикациями на страницах в Facebook и ВКонтакте Президент и Правительство 18.05.2015. Опубликован перечень поручений В. Путина по итогам совещания с членами Правительства, состоявшегося 29 апреля 2015 г. Ссылка 18.05.2015. Опубликован...»

«Муниципальное бюджетное общеобразовательное учреждение – средняя общеобразовательная школа №3 г. Аркадака Саратовской области «Согласовано» «Согласовано» «Утверждаю» Руководитель МО Заместитель директора по УВР Директор МБОУ-СОШ № 3 г. Аркадака /Драгункина И.В./ МБОУ-СОШ №3 г. Аркадака / Васильева О.А./ ФИО / Богомолова Е.К./ ФИО Протокол № 1 от « » августа 2014 г. ФИО « » августа 2014 г. Приказ № от « » августа 2014 г. РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по окружающему миру 3-а класс Драгункиной Ирины...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кемеровский государственный университет» Кемеровский государственный университет филиал в г. Прокопьевске (Наименование факультета (филиала), где реализуется данная дисциплина) Рабочая программа дисциплины (модуля) ДС.Ф.3 Стратификационные основы социальной работы (Наименование дисциплины (модуля)) Направление / специальность подготовки...»

«ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ Методические рекомендации по подготовке к итоговому сочинению (изложению) для участников итогового сочинения (изложения) Москва ОГЛАВЛЕНИЕ 1. ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ УЧАСТНИКОВ ИТОГОВОГО СОЧИНЕНИЯ (ИЗЛОЖЕНИЯ) 3 2. ОСОБЕННОСТИ ФОРМУЛИРОВОК ТЕМ ИТОГОВОГО СОЧИНЕНИЯ 9 3. ОСОБЕННОСТИ ТЕКСТОВ ДЛЯ ИТОГОВОГО ИЗЛОЖЕНИЯ 11 4. ПРОВЕРКА ИТОГОВОГО СОЧИНЕНИЯ (ИЗЛОЖЕНИЯ) 15 5. ПРАВИЛА ЗАПОЛНЕНИЯ БЛАНКА РЕГИСТРАЦИИ И БЛАНКОВ ЗАПИСИ УЧАСТНИКОВ ИТОГОВОГО СОЧИНЕНИЯ...»







 
2016 www.metodichka.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Методички, методические указания, пособия»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.